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ELISA實(shí)驗(yàn)加樣防錯(cuò)小竅門(mén)

  • 發(fā)布日期:2019-04-02      瀏覽次數(shù):2125
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          ELISA加樣時(shí)的防錯(cuò)小竅門(mén)

          (1)用一張寫(xiě)滿字的紙,字越多越好,比如報(bào)紙,墊在下面,這樣,加過(guò)標(biāo)本的小孔看過(guò)去下面的字會(huì)變小,沒(méi)加的字正常,非常容易區(qū)分。

          (2)可以利用液面反光與沒(méi)有加的孔加以區(qū)別。

          (3)在標(biāo)本加完后,再把加樣槍全壓下,使液面產(chǎn)生小氣泡,也可以加以區(qū)分。

          實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題解析

          問(wèn):做間接Elisa法測(cè)試小鼠血清中的IgE抗體,設(shè)空白對(duì)照、和陰性對(duì)照、陽(yáng)性血清稀釋倍數(shù)為5千、1萬(wàn)、10萬(wàn)、20萬(wàn)不等,用的是生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgE抗體,和親和素的辣根過(guò)氧化物酶。可是結(jié)果除了空白對(duì)照孔沒(méi)有顏色外,其余各孔全有顏色,而且OD值都相差不大,為什么?

          答:可能原因如下: 
          (1) 水質(zhì)被金屬離子等污染;防止辦法盡量使用新鮮水或蒸餾水。
          (2) 洗滌不充分,樣品中其它成分殘留或酶殘留;防止辦法洗滌液應(yīng)注滿微孔,充分洗滌。
          (3) 移液頭重復(fù)使用,未洗凈或消毒不*; 防止辦法移液頭一次性使用。
          (4) 酶標(biāo)板靈敏度過(guò)高。
          (5) 一抗顯色時(shí)間的控制等等,關(guān)于ELISA的每一步都要注意才行。

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