何為ELISA邊緣效應(yīng)?

    邊緣效應(yīng)的定義是酶標(biāo)板孔內(nèi)中心部分與酶標(biāo)板孔內(nèi)遠(yuǎn)離中心部分之間相比存在明顯的信號(hào)差異，一般歸因于兩個(gè)主要因素。

    孵育環(huán)境確實(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)有影響嗎？

    是的。孵育時(shí)溫度不均會(huì)引起邊緣效應(yīng)。請(qǐng)嚴(yán)格按照推薦的溫度進(jìn)行孵育。如果條件允許，可以在能夠控溫的孵育器中進(jìn)行孵育。

    在使用之前將所有試劑平衡至室溫。（除非特別說(shuō)明）

    在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前檢查工作的環(huán)境溫度。如果曲線很平直，可能是由于工作環(huán)境溫度低于氣溫所致。

    在孵育末期我注意到蓋板一側(cè)突起來(lái)了，這是否會(huì)影響我的實(shí)驗(yàn)結(jié)果？ 

    蓋板如果使用不恰當(dāng)會(huì)導(dǎo)致邊緣效應(yīng)。

    使用96孔板的ELISA測(cè)定中，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)”，即外周孔顯色較中心孔深。經(jīng)研究證實(shí)在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，在實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)ELISA測(cè)定中，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱，板也升溫時(shí)，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時(shí)，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)”，并且可提高測(cè)定的重復(fù)性。 

    Elisa試劑盒還有就是在試驗(yàn)中，必定有運(yùn)用微量加樣器參加樣本的步驟。提示留意：加樣不行太快，要防止加在孔壁上部，不行濺出和發(fā)生氣泡。ELISA試劑盒太快的話無(wú)法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易致使非特異吸附。濺出會(huì)對(duì)附近孔發(fā)生污染。出現(xiàn)氣泡則反響液界面有區(qū)別。所以，有時(shí)分一份標(biāo)本用一樣的試劑盒這次測(cè)定為陽(yáng)性，下次測(cè)定為陰性，通常就是上述加樣及試劑的過(guò)錯(cuò)所造成的。



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