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細胞裂解液樣本及組織勻漿樣本的正確采集方法

  • 發布日期:2015-06-16      瀏覽次數:7873
    • 通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細胞培養上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的*步,下面簡單介紹一下細胞裂解液樣本及組織勻漿樣本的正確采集、處理方法。

      細胞裂解液

      1) 吸去培養板內的培養基,用胰酶消化細胞,加適量培養基將細胞從培養板上吹下來。懸浮細胞可省略。

      2) 收集細胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養基,用預冷的PBS潤洗3次。

      3) 加入適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。

      4) 將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復凍融幾次,使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎,以達到裂解的目的。

      5) 410000×g 離心10min,除去細胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。

      組織勻漿液

      1) 將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質。

      2) 將組織塊稱重,記錄后剪碎,碎塊應盡量小,便于勻漿得更充分。

      3) 將組織按一定的比例加入預冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿時置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量:PBS體積=1:9的比例勻漿,例如1g的組織樣本對應9mLPBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,檢測后計算樣品濃度時應乘以相應的稀釋倍數)。

      4) 吸取勻漿液到離心管,45000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。

      注意:保證樣本不含NaN3,因為NaN3會抑制HRP的活性,從而導致假陰性的結果。

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