大鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：                                              96T

50pg/ml- 1600pg/ml

 使用目的：

本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本β內(nèi)啡肽(β-EP)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)水平。用純化的大鼠β內(nèi)

啡肽(β-EP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入β內(nèi)啡肽(β

-EP)，再與 HRP 標記的β內(nèi)啡肽(β-EP)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過

*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化

成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的β內(nèi)啡肽(β-EP)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長

下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中大鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)濃度。   

試劑盒組成   

1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶

2  酶標試劑  6ml×1瓶  8  標準品(3200pg/ml)  0.5ml×1 瓶

3  酶標包被板  12 孔×8條  9  標準品稀釋液  1.5ml×1 瓶

4  樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說明書  1 份

5  顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 張     

6  顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個

標本要求   

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

1.  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

1600pg/ml  5 號標準品  150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液

800pg/ml  4 號標準品  150µl的5 號標準品加入150µl標準品稀釋液

400pg/ml  3 號標準品  150µl的4 號標準品加入150µl標準品稀釋液

200pg/ml  2 號標準品  150µl的3 號標準品加入150µl標準品稀釋液

100pg/ml  1 號標準品  150µl的2 號標準品加入150µl標準品稀釋液

 2.  加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同) 、標準孔、

待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣50µl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。       

4.  配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復 5次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。   

7.  溫育：操作同3。

8.  洗滌：操作同5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10.  終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色) 。

11.  測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值) 。 測定應在加終止

液后 15分鐘以內(nèi)進行。

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值

大于標準品孔*孔的OD 值) ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計

算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5) 。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存： ；2-8℃。

2．有效期：6個月