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化學發光免疫測定技術

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    化學發光免疫測定技術

          化學發光免疫測定技術,化學發光免疫測定(chemiluminesent immunoaay,CLIA)是免疫測定技術繼酶免技術(EIA)、放免技術(RIA)、熒光免疫技術(FIA)和時間分辨熒光免疫技術(TRFIA)之后發展的一項新興測定技術。

    化學發光酶免疫測定(chemiluminescent enzyme immunoaay,CLEIA)從標記物性質來看應屬酶免疫測定。CLEIA測定中的兩次抗原抗體反應步驟均與酶免疫測定相同,僅zui后一步酶反應所用的底物為發光劑而非顯色劑。CLEIA中常用的兩種標記酶是HRP和ALP,其原理如下。
    HRP標記的CLEIA
    HRP標記的CLEIA常用的底物為魯米諾或其衍生物。魯米諾的氧化反應在堿性緩沖液中進行,通常以pH8.6的0.1mol/LTrig緩沖液作底物液,當HRP與魯米諾在堿性環境下發生氧化反應時,魯米諾將能量轉移并zui終以發射光子的形式釋放,而光的強度與被測物的濃度成正比;此外,HRP催化魯米諾氧化的反應可被某些酚試劑(如鄰碘酚)或螢火蟲熒光素酶等加強。加強劑的作用是增強發光和延長發光時間,由此可提高檢測的敏感度。

    ALP標記的CLEIA
    在以ALP為標記酶的CLEIA中,應用的底物一般為adamantyl dioxetase phohate及其衍生物如D等。當ALP與底物相互作用時,ALP使底物由能量基態轉變為激發態,當非穩態的底物以光子形式將能量轉移,并回到基態時,其發光的強度則與被測物的濃度成正比,因此測定反應產物的發光強度即可獲得被測物的濃度。

          基本原理是將化學發光系統與免疫反應相結合,以檢測樣本中的抗原或抗體,由于它既具有免疫反應的高度特異性,又具有發光反應的高敏感性,且對環境公害小,因此近年來已被國內外臨床實驗室及科研單位,廣泛應用于各種激素、特種蛋白及藥物的監測和分析。
    化學發光分析技術根據其標記物的不同可大致分為3大類:化學發光酶免疫測定、化學發光標記免疫測定、電化學發光免疫測定。

     
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